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細胞培養操作：

收貨處理取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養

傳代代數可傳5代左右；3代以內狀態最佳

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4.待細胞貼壁后，培養觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養基。

商品屬性：

細胞基本屬性：

圖

原代細胞培養的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當的緩沖液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進行消化。消化時間可根據具體實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計數?：將消化后的細胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數。

五、?按30萬/毫升分瓶培養?：將計數后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養。

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