实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
公司细胞广泛用于国内院校的细胞生物学研究，作为实验项目研究。下列产品详细介绍：
产品名称 | 生长特性 | 货号 |
结直肠腺癌细胞；HT-29 | 贴壁生长 | EY-X63288 |
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细胞名称 结直肠腺癌细胞；HT-29
形态特性: 上皮样
生长特性: 贴壁生长
特征特性: 该细胞是1964年由FoghJ用移植培养方法和含15%FBS的F12培养液从原发性肿瘤分离的。近来，已建株的培养细胞用含血清的McCoy's5a培养基培养。该细胞系在裸鼠中成瘤，也能在类固醇处理的地鼠中成瘤。该细胞可合成IgA、CEA、TGFβ结合蛋白和黏液素；表达受体，但没有检测到血浆酶原活性；不表达CD4，但细胞表面表达半乳糖神经酰胺（HIV的可能替代受体）。该细胞系癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos阳性；p53基因过表达，并且在273位密码子处发发生G
培养条件: DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)5%FBS
传代方法: 1:3~1：8传代；每周2~3次换液。
传代情况: P143
冻存条件: 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测: 培养法（-）
冷冻保存细胞之方法
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作步骤:
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除细胞消化液。加入含血清的 *细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除细胞消化液后，加入含血清的*培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
小鼠杂交瘤细胞；ZMA1形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-AKT1 Polyclonal Antibody
小鼠杂交瘤细胞；16G12形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-BTLA Polyclonal Antibody
小鼠杂交瘤细胞；ZMA6形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-CENPH Polyclonal Antibody
小鼠杂交瘤细胞；ZMB5形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-SIGLEC15 Polyclonal Antibody
小鼠杂交瘤细胞；LCDV-V形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody
小鼠杂交瘤细胞；WSSV-A形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-FLT4 Polyclonal Antibody
小鼠杂交瘤细胞；VEGF形态特性: 淋巴母细胞样生长特性: 半贴壁生长Anti-CASP3 Polyclonal Antibody
L-MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb2-溴-6-氟甲
L-氨酸MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb5-吡-2-羧酸
L-Presenilin 1 AntibodyN-基-哌啶酮
L-(标准品)PSD95 (7E3) Mouse mAb5-溴-2-酚
L-β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氟-溴吡啶
L-(标准品)β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)异
L-(sigma)NUT (C52B1) Rabbit mAb2--5-并噻唑
DL-CD11c (3.9) Mouse mAb (APC Conjuga)2--并噻唑
肌氨酸Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb1-溴-3,二甲氧基烷
-DL-Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb2',3'-异叉腺苷
L-亮氨酰RalBP1 (I33) Antibody5-酰基-2-甲基吡啶
蒜氨酸(标准品)Nicastrin Antibody3,二酮
L-ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb环戊
DL-ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb2,5-二氟
L-(标准品) Tuberin/TSC2 (28A7) Rabbit mAb氮杂环丁烷盐酸盐
L-Histone H2A (L88A6) Mouse mAb邻三氟肼
DL-赖氨酸CD14 (61D3) Mouse mAb (APC Conjuga)六水硝酸铥
DL-盐酸盐Histone H3 (96C10) Mouse mAb2,二氟
左旋肉；T；Histone H3 (96C10) Mouse mAb(氟甲酰)酸
;左旋肉（标准品）PRC1 Antibody-氟
L-钠，一水Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb2,二氟
L-谷氨酰(标准品)Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAb氟-1,2-二
（还原型）Notch Isoform Antibody Sampler Kit1,1,1-三氟-2,戊二酮
L-（标准品）Helios (D4Z6D) Rabbit mAb2-溴-5-硝基三氟甲
（氧化型）Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)
L-高;(S)-2-氨基-羟基丁酸BLNK (D3P2H) XP® Rabbit mAb羟基吡咯并[2,d]嘧啶
DL-异BLNK (D3P2H) XP® Rabbit mAb溴三
L-赖氨酸盐酸盐SATB1 (P472) Antibody
L-盐酸盐T2 (D6C7K) Rabbit mAb (Mouse Specific)2,4,6-三(2-吡啶基)三
L-天CDC73 (A264) Antibody三基氧翁四氟酸
L-天(标准品)CDC73 (D410) Antibody2-三氟甲基吡啶
L-半胱酸盐酸盐无水物SATB1 (L745) Antibody羟基-6-(三氟甲基)嘧啶-2-硫
L-对硝基酰cdc25A Antibody2-硝基咪唑
;S-羧甲基-L-半Akt (pan) (40D4) Mouse mAb (Sepharose® Bead Conjuga)三氟肼
S-苄基-L-半GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)(三氟甲基)肼
L-盐酸盐GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)3',4'-二氟酮
胞样生长特性: 贴壁生长Anti-CD63 Polyclonal Antibody
结直肠腺癌细胞；HT-29大鼠艾杜糖硫酯酶(IDS)ELISA试剂盒CD30ELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA试剂盒CD44ELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒CD4ELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠(trypsin)ELISA试剂盒CD6ELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠复合前列腺特异性抗原(CPSA)ELISA试剂盒CD8ELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PIAb-IgG/IgM)ELISA试剂盒CDK-4ELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)ELISA试剂盒CDK5ELISAKit产品规格:48T/96T。
大鼠抗心肌抗体(AMA)ELISA试剂盒CDl4ELISAKit产品规格:48T/96T。
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