細胞的培養方法
以前認為紅細胞、粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等血細胞都屬終末分化細胞,很難在體外培養生長或僅能短期培養而不能傳代,近年來由于淋巴細胞培養基技術的發展,已有血細胞培養成功的報道,正常血細胞在體外培養生長時間短,只有白血病細胞,血友病細胞、淋巴瘤細胞可培養成功并建立細胞系,但多半為EB病毒等致瘤病毒引起的轉化細胞,(EBNA檢查陽性),二甲基亞砜(DMSO)處理也可誘導這些細胞分化發生逆轉,表現為正常細胞。所建立的細胞系多半為單核細胞系、B淋巴細胞系、T淋巴細胞系,只在IL-2產品問世后,T細胞才可在體外建系、建株。
血細胞可從外周血中用梯度液通過離心分層后分離獲得。也可從脾臟、扁桃體、淋巴結中用機械法切碎過篩分離獲得淋巴細胞,從腹腔刺激后的沖洗液中可獲得大量的單核-巨噬細胞,從骨髓中可以獲得前提血細胞,并可培養生長。加入生長因子或某些物質有利于細胞純化并促進分化和生長繁殖,例如在淋巴細胞中加入IL-2(TCGF),可促進T細胞生長,建立T淋巴細胞系。在多發性骨髓瘤細胞(B細胞)培養中,加B細胞生長因子,可建立B細胞系;加入IL-6(或正常淋巴細胞培養48h的培養上清中的IL6)可使B細胞在體外培養,建立了IL-6依賴的B9細胞系。在骨髓單個核細胞培養中加入二羥基3,可使單個核細胞分化為成骨細胞及破骨細胞。
人臍帶血來源方便,采集容易,對母嬰均無傷害。近年來研究表明,臍帶血的血漿中富含許多高水平的造血活性物質,具有刺激和促進骨髓造血干/祖細胞增殖、分化和再植能力的功能,是造血生長因子的重要來源。
臍帶血中富含類似于骨髓的造血干細胞,其中CFU-G、BFU-E、CFU-GM近似或高于正常成人骨髓和外周血中的造血干/祖細胞,比骨髓更原始,具有很強的自我復制和再植能力。臍帶血中還含有類似于骨髓的基質細胞,對骨髓造血具有支持作用,在體外培養擴增中具有更大的增值能力,是造血干細胞的理想來源,已被應用于Fanconi貧血、某些白血病和惡性腫瘤的治療,并容易獲得骨髓造血功能的重建。
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